Ինչ վեկտորները պետք է անեն գեների եւ կրկնօրինակի հետ
Մոլեկուլային կլոնավորման մեջ վեկտորը ԴՆԹ մոլեկուլ է, որը ծառայում է օտարերկրյա գենի (ներ) փոխանցման կամ ներդնելու համար կրողը մեկ այլ բջիջի մեջ, որտեղ այն կարող է վերարտադրվել եւ / կամ արտահայտվել: Վեկտորները գենային կլոնավորման համար անհրաժեշտ գործիքներից են եւ առավել օգտակար են, եթե նրանք նաեւ բնութագրում են մի տեսակ մարկեր գեն, որը կոդավորում է բիոիդիկացնող մոլեկուլը, որը կարող է չափվել կենսաբանական գնահատման մեջ `հյուրընկալող օրգանիզմում դրանց տեղադրումը եւ արտահայտումը ապահովելու համար:
Մասնավորապես, կլոնավորման վեկտորը ԴՆԹ է, որը վերցված է վիրուսներից, պլազմիդից կամ բջիջներից (ավելի բարձր օրգանիզմների), որոնք պետք է տեղադրվեն օտարերկրյա ԴՆԹ-ի կաղապարի նպատակով: Քանի որ կլոնավորման վեկտորը կարող է կայունորեն պահպանվել օրգանիզմում, վեկտորը պարունակում է նաեւ առանձնահատկություններ, որոնք թույլ են տալիս դյուրին դնելու կամ հեռացնել ԴՆԹ: Կլոնավորված վեկտորից հետո, ԴՆԹ-ի հատվածը կարող է հետագայում եւս փոխարկվել մեկ այլ վեկտորի մեջ, որը կարող է օգտագործվել ավելի կոնկրետության մեջ:
Որոշ դեպքերում վիրուսները օգտագործվում են բակտերիաների վարակման համար: Այս վիրուսները կոչվում են բակտերիոֆագներ կամ ֆագ, կարճ: Retroviruses- ը հիանալի վեկտորներ են `կենդանիների բջիջներին գեն ներթափանցելու համար: Պլազմիդները, որոնք ԴՆԹ-ի շրջանաձեւ կտորներ են, օտարերկրյա ԴՆԹ-ի ներմուծման համար օգտագործվող ամենատարածված վեկտորներն են մանրէային բջիջների մեջ: Նրանք հաճախ ունենում են հակաբիոտիկ դիմադրողականության գեներներ, որոնք կարող են օգտագործվել փորձարկելու պլազմիդային ԴՆԹ-ի արտահայտումը `հակաբիոտիկային տերեւների վրա:
Gene փոխանցումը բույսերի բջիջներում սովորաբար կատարվում է Agrobacterium tumefaciens հողի մանրէների միջոցով, որը հանդես է գալիս որպես վեկտոր եւ ներառում է մեծ պլազմիդ հյուրընկալող բջիջ: Միայն կլոնային վեկտորի պարունակող բջիջները կաճեն, երբ հակաբիոտիկները ներկա լինեն:
Կլոնավորման վեկտորների հիմնական տեսակները
Վեկտորների վեց հիմնական տեսակները հետեւյալն են.
- Պլազմիդ: Բյուրեղային օֆստրկոսոմոսոմային ԴՆԹը, որը ինքնուրույնորեն կրկնօրինակում է բակտերիալ բջիջը: Պլազմիդները, ընդհանուր առմամբ, ունեն բարձր պատճենահանման համարներ, օրինակ, pUC19, որն ունի մեկ բջիջի 500-700 օրինակ պատճեն:
- Phage. Գծային ԴՆԹ մոլեկուլները բակտերիոֆագային լամբդայից ստացվում են: Կարելի է փոխարինվել օտարերկրյա ԴՆԹ-ով `առանց կյանքի ցիկլի խանգարելու:
- Cosmids. Մեկ այլ շրջանաձեւ օֆստրկոսոմոսոմային ԴՆԹ մոլեկուլ, որը համատեղում է պլազմիդների եւ ֆագի առանձնահատկությունները:
- Բակտերիալ արհեստական քրոմոսոմներ: Հիմնվելով բակտերիալ մինի F պլազմիդների վրա:
- Խմորիչ արհեստական քրոմոսոմներ: Սա արհեստական քրոմոսոմ է, որը պարունակում է տոմոմերներ (մեկանգամյա բուֆերներ, որոնք բաժանվում են բջիջների բաժանման ժամանակ), վերարտադրման ծագմամբ, խմորիչի ցենտրամերա (քրոմոսոմի մի մասը, որը կապում է քույր քրոմատիդների կամ դիադի) եւ ընտրովի մարկեր խմորիչ բջիջներում հայտնաբերելու համար:
Մարդու արհեստական քրոմոսոմ: Այս տեսակի վեկտորը պոտենցիալ օգտակար է մարդու բջիջների մեջ գենի փոխանցման համար եւ արտահայտման ուսումնասիրման գործիք եւ որոշելու մարդու քրոմոսոմի գործառույթը: Այն կարող է կրել շատ մեծ DNA հատված:
Բոլոր նախագծված վեկտորները ունեն վերարտադրության ծագումը (կրկնօրինակ), միացման վայր (որտեղ տեղակայված է օտարերկրյա ԴՆԹ-ի տեղադրումը ոչնչացնում է էական մարկերների վերարտադրումը կամ անգործունակությունը) եւ ընտրովի նշողը (սովորաբար գեն, որը դիմադրողական է հակաբիոտիկին):