Այս բուֆերը օգտագործվում է ԴՆԹ-ի էլեկտրաֆորեզի բաժանման համար
TBE բուֆերը հատկապես օգտակար է փոքր DNA հատվածների (MW <1000) բաժանման համար, ինչպիսիք են սահմանափակման ֆերմենտային հյութերի փոքր արտադրանքները:
TBE- ն ունի ավելի մեծ բուֆերային հզորություն եւ կտրուկ լուծում կտա, քան TAE բուֆերը : TAE բուֆերը հանդիսանում է Tris բազայի, քացախաթթվի եւ EDTA- ից (Tris-acetate-EDTA) կազմված լուծում:
TBE- ը, ընդհանուր առմամբ, ավելի թանկ է, քան TAE- ն եւ արգելում է ԴՆԹ-ի լիգիան, որը կարող է խնդիրներ առաջացնել, եթե հետագա ԴՆԹ-ի մաքրման եւ միացման փուլերը նախատեսված են: Հետ երեք պարզ քայլերը, սովորեք, թե ինչպես կատարել TBE բուֆեր: Դա բուֆեր ստեղծելու համար չպետք է ավելի քան 30 րոպե տեւի: Ահա թե ինչպես:
Պատրաստել EDTA- ի ֆոնդային լուծույթ
Անհրաժեշտ է պատրաստել EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) լուծումը: EDTA- ն ամբողջությամբ չի լուծվի, մինչեւ pH- ն ճշգրտվի մինչեւ մոտ 8.0: 0.5 ՄԵԹԹ-ի 500 միլիլիտր ֆոնդային լուծույթի համար կշռում են 93.05 գրամ EDTA դիսիդոլի աղ (FW = 372.2): Այնուհետեւ լուծարեք այն 400 միլիլիտի դեզիոնացված ջրի մեջ եւ կարգավորեք pH- ը NaOH- ով: Դրանից հետո, մինչեւ 500 միլիլիտրի վերջնական ծավալը լուծելու համար:
Պատրաստեք TBE ֆոնդային լուծույթ
Կատարել ԹՄԳ-ի կենտրոնացված (5x) ֆոնդային լուծույթը, կշռելով 54 գրամ Tris բազան (FW = 121.14) եւ 27,5 գ բորային թթու (FW = 61,83) եւ լուծարման համար, այնպես էլ `մոտ 900 մլիտր դեոնացված ջրի մեջ: Այնուհետեւ ավելացրեք 20 միլիլիտր 0.5 Մ EDTA (pH 8.0) եւ կարգավորեք լուծումը վերջնական ծավալը 1 լիտր:
Այս լուծումը կարելի է պահպանել սենյակային ջերմաստիճանում, սակայն հին լուծումներով կպահպանվեն աղբը: Պահպանեք բուֆերային ապակու շշերի մեջ եւ վերացեք, եթե ձեւավորվել է նստվածք:
Պատրաստել TBE- ի աշխատանքային լուծում
For agarose գել electrophoresis, TBE բուֆեր կարելի է օգտագործել 0.5x (1:10 խտացված ֆոնդային զտման) կոնցենտրացիան: Խառնել պաշարների լուծույթը, 10 րոպե deionized ջրի մեջ: Վերջնական լուծման կոնցենտրացիաները 45 մմ Tris-borate եւ 1 մմ EDTA են: Բուֆերը այժմ պատրաստ է օգտագործելու ծղոտե գել :
Ինչ Ձեզ անհրաժեշտ է
TBE բուֆեր դարձնելու համար անհրաժեշտ է ընդամենը չորս նյութեր: Այս ցուցակի մնացած կետերը սարքավորում են: Չորս նյութերը պահանջում են EDTA դիոդիումի աղ, Tris բազա, boric թթու եւ deionized ջուր:
Ինչ վերաբերում է սարքավորմանը, ապա ձեզ հարկավոր է անհրաժեշտ լինել pH չափիչ եւ ստիբուլացման ստանդարտներ: Դրանից բացի, դուք պետք է 600-միլիլիտր եւ 1500-միլիլիտր խմիչք կամ շշեր: Ձեր սարքավորումների կարիքները կլորացվում են ավարտել բալոններ եւ խառնել շերտերը եւ խթանել թիթեղները:
Ստուգեք գույքագրումը լաբորատորիայում, որը դուք կօգտագործեք, որպեսզի համոզվեք, որ դուք ունեք այն ամենը, ինչ անհրաժեշտ է, նախքան սկսելը: Ոչինչ ավելի վատն է, քան լուծումը պատրաստելիս կանգ առնելը, քանի որ դուք դուրս եք գալիս համապատասխան նյութերից:
Եթե ձեր լաբորատորիան գտնվում է դպրոցում կամ ձեր աշխատանքային կայքում, ստուգեք պատշաճ անձնակազմի համար, որպեսզի տեսնեք, որ դրանք ունեն բոլոր նյութերը ֆոնդային բորսայում: Դրա արդյունքում կարող է խնայել ժամանակն ու էներգիան վերջում: